空氣中存在著許多對人體健康有害的物質，懸浮於空氣中的微生物（生物氣膠 (bioaerosols)）即是其中之一。近年來許多針對室內及室外作業場所生物氣膠之研究，大部分多使用培養法作為其分析環境中總細菌濃度之方法；然而已知生物氣膠具有活性但不可培養 (viable but non-culturable (VBNC))之特性，造成以培養法分析時會低估實際暴露濃度。 本研究透過核酸染劑結合即時定量聚合酶連鎖反應 (real-time quantitative polymerase chain reaction, qPCR)，初步建立定量空氣中活性細菌的方法。本研究比較不同的核酸染劑(ethidium monoazide (EMA) 及propidium monoazide (PMA))以及不同的濃度之效能、測試其線性關係範圍，並於高濃度細菌暴露之職場進行方法驗證之前測。 結果顯示，相較於未添加核酸染劑之對照組，加入EMA或PMA之受熱組樣本，其qPCR所得之DNA濃度顯著較低，顯示EMA與PMA皆可有效抑制受熱組細菌DNA於qPCR之放大。進一步觀察不同濃度核酸染劑間之反應，結果顯示濃度為1.5 μg/mL之PMA可有效抑制受熱組細菌DNA於qPCR放大，並且在此濃度下明顯不會對活性細菌造成qPCR定量細菌濃度干擾。因此本研究以1.5 μg/mL PMA結合qPCR作為定量空氣中活性細菌之最佳條件。 研究進一步以最佳核酸染劑條件1.5 μg/mL PMA評估偵測細菌濃度範圍，結果顯示其線性範圍介於1.0 ×104 ~ 1.0 ×1010 CFU/mL。實場前測部份，本研究將開發方法應用於分析職業場所空氣採樣之樣本，其量測職場包括家禽舍、畜牧場、木材行、水稻田、蔬菜田及醫療院所。研究結果顯示此方法在定量職業環境空氣中總細菌具有可行性。