內容簡介
PCR是二十一世紀末最重要的分子生物技術之一。此技術的發明,造成生命科學研究的速度增快成千上萬倍,並使得以核酸為基礎的檢驗得以臨床應用,如著床前或產前診斷,能更精確地親子鑑定或罪犯鑑定,及病原體的偵測等。因此PCR技術是所有研究生命科學者所必備的基本知識。本書作者從PCR的發現開始介紹,依序介紹一般PCR進行步驟、試劑、儀器及實驗可能發生的問題,後後再介紹新的PCR方法及應用,包括Long PCR、RT-PCR、定量PCR…等等。是一本相當不錯的參考書。
作者介紹
◎張建裕醫師//開業中醫師,對PCR的研究相當有興趣,利用大部分業餘時間在張建國醫師的實驗室進行研究已十多年。曾發表多篇相關論文。◎張建國醫師//高雄醫學院醫學系,曾任內科、血液科及臨床病理科醫師。現任中國醫藥大學研究發展處處長及附設醫院檢驗醫學部主任。主要研究領域為遺傳病及癌症相關研究,已發表PCR技術相關的論文上百篇,是台灣地區最早將PCR方法應用在臨床研究的學者之一。
序
聚合(酉每)鏈鎖反應 (Polymerase Chain Reaction,簡稱PCR),是二十世紀末最重要的發明之一,此技術的發明使生命科學的研究速度增快成千上萬倍,讓學者能在短時間內完成生物體的完整基因定序,並使基因診斷能夠真正的臨床應用。 將近二十年的發展,PCR技術的應用從早期只能擴增幾百個鹼基,到目前的幾萬個鹼基,而過去PCR無法精確的估計檢體中欲測物的濃度,現在則利用Real-time定量PCR的方法,已可相當精確評估量的變化,因此PCR技術是研究生命科學必不可缺的工具。希望本書能對PCR技術應用入門者有所幫助。中國醫藥大學 檢驗醫學部張建裕張建國
目次
第一章 什麼是PCR1-1PCR的發現2PCR發展史41-2PCR的原理51-3PCR的儀器101-4PCR的應用簡介131-5影響PCR的相關變數15參考文獻19第二章 如何做好PCR2-1模 板 (Template):DNA及RNA的淬取222-2 引 子 (Primer)282-3溫 度322-4 DNA聚合382-5 緩衝液 (Buffer)432-6污 染442-7問題及解決方案50參考文獻56第三章 純化PCR產物及定序3-1 純化PCR產物的方法603-2定序的方法653-3載 體 (Vectors)77參考文獻90第四章 如何利用PCR產生Probe4-1標誌的方法944-2 Blotting (轉印、墨跡、點墨、吸乾)100參考文獻103第五章 以DNA為材料的PCR5-1一般PCR及應用 1065-2 Multiplex PCR及其應用 1225-3 Random primer PCR (RAPD or AP-PCR)1265-4Amplification refractory mutation system (ARMS)1295-5ACRS (Amplified Created Restriction Sites)1325-6Amplification of unknown flanking DNA by single specific primer133參考文獻143第六章 以RNA為材料的PCR6-1RT-PCR及Nested RT-PCR1486-2 RNA display,Differential display-PCR (DD-PCR)154參考文獻160第七章 與量有關的PCR7-1 影響量有關的因素1647-2半定量RT-PCR (Semi-quantitative RT-PCR)1667-3定量同步 PCR (Real-time quantitative PCR)168參考文獻179